川芎提取,纯化工艺条件的实验研究

川芎提取、纯化工艺条件的实验研究

马双成　(中国药品生物制品检定所　北京100050)

邓少伟　(国家中药品种保护审评委员会　北京100021)

摘要　目的:川芎提取纯化工艺条件的实验研究。方法:乙醇回流提取减压浓缩,过大孔吸附树脂柱,先用水洗,再用30%乙醇洗脱,收集30%乙醇洗脱液,减压浓缩得川芎总提物,HPLC方法检测。结果:提取物收率为0.6%,其中川芎嗪和阿魏酸的含量约占本品的25%～29%。结论::方法简便,准确,可推广适用于生产。

关键词　川芎总提物　提取　分离　大孔树脂

　　川芎的研究始于30年代,其化学成分相当

复杂。文献[1]报道:川芎的总生物碱和酚性成分有较明显的扩张冠脉,增加冠脉血流量,降低心肌耗氧量,抑制ADP诱导的血小板的凝集、对已凝集的血小板有解聚作用、降低血小板的表面活性等药理作用。川芎中具有较强生理活性的成分川芎嗪的含量为0.01%～0.02%,阿魏酸的含量约为0.1%[2]。川芎嗪和阿魏酸总提物的提取方法多用乙醇提取,酸碱处理以及柱层析分离[3,4],但这种方法不适用于工业生产。作者结合生产实际,对提取物中保留总生物碱以及酚类化合物的提取工艺做了大量的研究工作,以求得到质量和收率稳定的产品。经多方面的试验研究,最终选用乙醇回流,减压浓缩,而后用大孔吸附树脂分离的方法,可得到质量和收率稳定的川芎总提取物,收率为0.6%,其中川芎嗪占5%～7%,阿魏酸占20%～22%,川芎嗪和阿魏酸二者共占25%～29%,试验如下。1　仪器、试药与原料

仪器:SP28800高效液相色谱仪(美国SP公司),SP2200紫外检测器(美国SP公司)

试药:川芎嗪和阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所,含量测定用)。试剂为分析纯。原料:大孔吸附树脂,川芎经本室肖新月副主任药师鉴定为伞形科植物川芎LigusticumchuanxiongHort.的干燥根。2　色谱条件　中国中药杂志　1999年第24卷第4期　

川芎嗪:色谱柱4.6mm×250mmODS2C18

μm;流动相甲醇2水(52∶柱,粒度1048),检测波

长293nm,灵敏度128AUFS,流速0.8ml/min,柱温30℃。

阿魏酸:色谱柱4.6mm×250mmODS218

μm,流动相冰醋酸2水2甲醇(1∶柱,粒度1065∶

35),检测波长313nm,灵敏度128AUFS,流速1.0ml/min,柱温40℃。3　标准曲线的绘制

川芎嗪:精密称取盐酸川芎嗪对照品约3.5mg,置50ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得对照品溶液(0.07mg/ml)。吸取该对

μ照品溶液1,3,5,7,9l,分别注入高效液相色谱

仪中测得峰面积,以对照品为横坐标,峰面积为纵坐标作图,得一条较好的标准曲线,回归方程为:Y=29584X+1705,r=0.9995,表明线

μg。性范围为0.08～0.69

阿魏酸:精密称取阿魏酸对照品约3.8g,置100ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得对照品溶液(0.038mg/ml)。吸取该对照品溶

μ液1,3,5,7,9l,分别注入高效液相色谱仪,测

得峰面积,以对照品为横坐标,峰面积为纵坐标,得一条直线,其回归方程为:Y=6228571X+200,r=0.9999,表明其线性范围为0.04～μg。0.344　测定方法

μ精密吸取对照品溶液3,7l和供试品溶液

μ5l,分别注入液相色谱仪,测得峰面积,按外标

・215・

两点法计算其含量。5　提取方法的确定

5.3　川芎总提取物提取时间的比较

为了得到所需要的总生物碱和酚性类成分,我们参考文献[4],拟采用乙醇回流,而后用大孔吸附树脂除糖,从而得到总提取物的方法来分离。

5.1　川芎总提取物提取溶剂的确定

取川芎的粗粉4g4份,分别置圆底烧瓶

内,用50ml95%乙醇分别回流提取30,60,90,120min,提取液回收乙醇至干,残渣以无水乙醇溶解,过滤,定容至100ml。测定结果见表3。

表3　10倍量95%乙醇回流不同时间

所得浸膏中阿魏酸含量

回流提取时间　min

306090120

根据文献报道,阿魏酸和川芎嗪两种成分均是从川芎的乙醇浸膏里提取而得,故可用乙醇作溶媒进行提取。川芎嗪无色针状结晶,有特殊臭味,具吸湿性,极易升华,且不易溶于水,但易溶于热水、石油醚,溶于乙醇、氯仿、稀硫酸,微溶于乙醚。阿魏酸溶于热水、乙醇及乙酸乙酯,尚易溶于乙醚,微溶于石油醚和苯。

取川芎的粗粉4g4份,分别置圆底烧瓶内,分别用75%,50%,95%乙醇回流提取3次,每次50ml,每次1.5h,提取液减压回收乙醇至干,残渣以无水乙醇溶解,过滤,定容至50ml,进行含量测定。测定结果见表1。

表1　不同浓度的乙醇提取川芎总提物中阿魏酸含量比较提取溶剂

95%乙醇75%乙醇50%乙醇含量　%

0.0850.0980.1090.108

　　川芎总提取物中阿魏酸含量以回流1.5h

为最高。5.4　川芎总提取物提取溶媒用量的比较

取川芎粗粉4g4份,分别置圆底烧瓶内,用20,30,40,60ml,95%乙醇分别回流提取1.5h,提取液回收乙醇至干,残渣以无水乙醇溶解,过滤,定容至100ml,测定结果见表4。

表4　不同溶媒用量阿魏酸测定结果溶媒用量含量　%

0.0800.1080.1100.109

%　x

RSD

581015

测定值

0.110　0.108　0.109　0.1080.099　0.101　0.100　0.0950.085　0.0　0.090　0.0

0.1090.0990.088

0.882.662.51

　　注:n=4

　　川芎总提取物中阿魏酸含量以95%乙醇为最高,75%乙醇次之,50%乙醇最低。5.2　川芎总提取物提取次数的比较

取川芎粗粉4g4份,分别置圆底烧瓶内,用95%乙醇分别回流提取3次,每次50ml,每次1.5h,提取液回收乙醇至干,残渣以无水乙醇溶解,过滤,定容至100ml,测定结果见表2。

表2　不同回流次数所得川芎总提物中

阿魏酸含量

回流次数

123

%　

x

RSD

测定值

0.090　0.092　0.091　0.0920.0910.110　0.122　0.108　0.1090.1100.113　0.112　0.110　0.1100.111

1.051.561.35

　　注:n=4

川芎总提取物中阿魏酸含量以回流3次最为高。・216・

川芎总提取物中阿魏酸含量以8～10倍量

为最高。

根据以上实验,以川芎总提取物中的活性成分阿魏酸为指标,采用高效液相色谱法,对不同提取条件下总提物中阿魏酸的含量进行测定。结果表明:以95%乙醇回流提取3次,溶媒用量为8～10倍,提取时间为1.5h为宜。6　大孔吸附树脂分离川芎总提取物

取川芎的醇提取物,加适量水,加热溶解,抽滤,滤液加到一预先装填好的大孔吸附树脂柱(膏和树脂的比例为1∶10～1∶20或药材与树脂的比例为1∶2～1∶3)上,先用水洗脱至糖的反应呈阴性,改用10%,20%,30%,40%,50%浓度的乙醇梯度洗脱,结合高效液相色谱法检测,发现30%浓度的乙醇即可把主成分(包括阿魏酸和川芎嗪)全部洗脱下来,所以选用

　中国中药杂志　1999年第24卷第4期　

30%乙醇洗脱即可将柱上的生物碱和酚性类成分全部洗脱下来(30%以上浓度的乙醇洗脱液

表6　川芎总提取物中阿魏酸的含量测定结果

总提取物量

g0.16950.17080.17210.1680

收率

%0.570.570.570.56

平均收率

%

含量

%20212122

平均含量

%

中未检出色谱峰)。

取川芎饮片,用8～10倍95%乙醇回流提

取3次,每次1.5h,提取液过滤,合并滤液,减压浓缩,得浸膏,加适量水加热溶解,抽滤,滤液加到一预先填装好的大孔吸附树脂柱上(膏和树脂的比例为1∶15～1∶20,或药材与树脂的比例为1∶2～1∶3)上,先用水洗脱至糖的反应呈阴性,改用30%乙醇洗脱,结合高效液相色谱法检测,合并30%乙醇洗脱液,减压回收乙醇,低温真空干燥得淡黄棕色粉末,即川芎总提取物(包括总生物碱和酚性类成分),收率0.6%,其中川芎嗪约占总提取物的5%～7%,阿魏酸约占总提取物的20%～22%,二者共占本品的25%～29%。含量测定结果见表5、表6。

表5　川芎总提取物中川芎嗪的含量测定结果

总提取物量

g0.16950.17080.17210.1680

0.57

21

　　注:药材量均为30g

吸附树脂柱,先用水洗,再用30%乙醇洗脱,收集30%乙醇洗脱液,减压浓缩得川芎总提取物,收率为0.6%,其中川芎嗪和阿魏酸的含量约占本品的25%～29%,该方法操作简单,收率稳定,适用于工业生产。

7.2　因川芎嗪极易升华,阿魏酸对热不稳定,

所以在提取回流过程中,一定要注意温度不要太高,尤其是在回收干燥过程中,尽量控制在60℃左右。8　参考文献

1　王宝琴主编.中成药质量标准与标准物质研究.北京:中国

收率

%0.570.570.570.56平均收率

%

含量

%6765

平均含量

%

医药科技出版社,1994.6152　阴健主编.中药现代研究与临床应用.北京:学苑出版社,

1993.1083　北京制药工业研究所.川芎生物碱的提取和分离.中草药

0.57　　

6

通讯,1997,(3):9

4　北京制药工业研究所.川芎有效成分的研究.药学学报,

1979,14(11):670

　　注:药材量均为30g

7　小结与讨论

7.1　川芎以乙醇回流提取,减压浓缩,过大孔

1998204213收稿

午时茶胶囊质量标准研究

周国平　罗跃华　章光文　(江西省药品检验所　南昌330046)

　　摘要　目的:制订午时茶胶囊质量标准。方法:用薄层色谱法鉴别苍术、厚朴、川芎、广藿香;用气相色谱法测定厚朴酚的含量。结果:定性定量方法简便,灵敏,准确,专属性强。结论:建立的方法可供控制质量用。

关键词　午时茶胶囊　厚朴酚　气相色谱法

　　午时茶胶囊系《中国药典》1995年版收载的午时茶冲剂剂型改进而成。原冲剂质量标准中仅有常规项检查和枳实的薄层色谱鉴别。在进行新药开发研究工作中,考虑到厚朴是方中

　中国中药杂志　1999年第24卷第4期　

君药,其所含主要成分厚朴酚具有抗菌消炎、镇

静作用,且厚朴酚是该制剂中的有效成分,所以选用气相色谱法对样品进行厚朴酚的含量测定。用薄层色谱法对苍术、厚朴、川芎、广藿香

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