制备活性肽的主要方法研究

《现代农业科技｝２００６年１２月　工作研究　制备活性肽的主要方法研究　岑怡红　方俊ｚ李宗军　孟德连　邓*　（Ｉ黔商南民族师专生化系，贵州兴义５６２４００；　湖南农业大学生化与发酵工程实验室，湖南正虹科技发展股份有限公司）　摘要　生物活性肽是一类多功能因子。它们涉度了一系列身体代谢和生理调节功能。我国有大量丰富的蛋白质资源，但资源利用率不　高，加工过程产生的大量下脚料度废弃物通常被当作肥料或直接排放掉，不仅造成了资源浪费，也造成了环境污染。怎样科学地选用原料　蛋白、酶类度分离精制方法。进一步提高生物活性肽的产品得率是决定能否将之推向产业化的重要因素，上述问题的深入探讨和合理解决　也将使生物活性肽的研究开发具有更广阔的前景。　关键词制备；活性肽；蛋白资源　肽的获得主要有３种途径：一是从富集活性肽的植物　或微生物中提取获得，二是通过化学方法（液相或固相），酶　法，重组ＤＮＡ技术等方法合成，三是消化过程中产生的或　体外分解完整蛋白质产生。　１酶解法　采用蛋白酶在最适温度和ｐＨ值条件下进行酶解反应　Ｉ１，２，３，４，５］．这种方法是在比较温和的条件下进行的，能较好地　控制生产，并且保存氨基酸的营养价值，较典型的制备方法　是采用低变性脱脂大豆粕作为生产原料。但大豆蛋白质经　酶解后，往往产生一定的苦味，随着水解程度的加深，苦昧　不断加重，须除去不良风味及抗营养物质。　２化学合成　根据目标肽的氨基酸排列顺序，用人工方法进行化学　合成，例如，１９５８年我国成功合成了具有生物活性的８肽一　催产素，此技术难点一是目标肽的氨基酸排列顺序要弄清　楚，二是生产过程复杂，成本高，目前已经成功地合成了近　百个氨基酸残基构成的多肽。在一些合成的活性肽中弓１进　一些Ｄ型氨基酸，或修饰某些氨基酸，有可能使活性肽不被　体内的水解酶降解，变得更加稳定，而且可提高其活性，带　有脂质，糖基和磷酸基团的肽类合成，在过去几年中也取得　了相当大的进展。　３提取法　主要是从富含肽的天然植物、微生物菌株中提取，或应　用基因重组技术改造过的体内能大量合成目标肽的植物、　微生物中通过一定工艺提取。此方法产量低，成本高。　４化学水解法　主要是酸水解法，多是利用些酸使蛋白中的肽链断裂，　由于不同的氢基酸其肽键合成力有差异．所以蛋白质中结　合力小的键先断开，形成长短不同的肽链，此方法简单，成　本低，但无法对水解过程进行有效控制，不断按设定的水解　度进行，氨基酸会受到损害，降低蛋白营养价值，而且水解　结束需将盐酸除去。　５微生物发酵法　利用从自然界中分离出的有益菌株，接种到蛋白质中　基金项目国家自然科学基金资助项目（３０２７９７６）；校创新团队基金资　助项目（０４ＴＤ０１）　作者简介岑怡虹（１９７８－），士，贵州安龙人，讲师，研究方向：植物生理。　收稿日期２００６—１０－２３　发酵。对菌种进行细菌学鉴定和特性研究，同时研究各菌种　在生长繁殖时分　的蛋白酶的酶学特性和对底物蛋白分子　的利用特点，然后根据各自的特点将菌种进行组合优化以　发酵生产符合各种所需性状的活性肽。　６噬菌体展示技术　噬菌体展示技术是从随机肽库中直接筛选受体的全新　配体的方法。其基本原理是在噬菌体的外壳蛋白ＰⅢ或ＰⅧ　的基因中随机地插入任意大小的多聚核苷酸片段，例如插　入约５Ｏ个核苷酸．就可能建立一个由ｌ５个氨基酸组成的　随机肽库。每个序列不同的噬菌体就是一个克隆，结合亲和　技术，可以得到能和特定配体专一结合的一些克隆，经过多　次反复的筛选，可以得到特异结合的克隆。最后经ＤＮＡ测　序，可以推定和配体专一结合肽段的序列。目前噬菌体展示　技术经常用于蛋白质抗原表位及其类似物的鉴定和筛选。　此外．噬菌体展示技术还可以得到各种类型分子的肽类模　拟物。用类似的方法也得到了葡萄糖淀粉酶的抑制剂，以及　可模拟小糖，并与抗糖类抗体和凝集素结合的活性肽嘲。　７利用噬菌体展示技术改造肽链的结构　利用噬菌体展示技术不仅可以建立随机的肽库，而且　还可以改造肽链的结构。一种方法是对不太大的蛋白质或　结构域，经过删繁就简，保持原有分子的活性，但是使分子　变小。其原理是，在分析原有结构的基础上，保持部分结构，　而使另外一部分序列缩小并随机化，然后利用噬菌体展示　技术筛选仍有活性的克隆，经过多次反复，就可能得到仍有　活性，但分子量更小的肽链。一个成功的例子是将细菌Ａ蛋　白的ｚ结构域最小化　一。另一种技术是以结构稳定的小分　子为Ｏｔ螺旋和Ｂ片层构成的分子支架为基础，改造分子表　面连接Ｏｔ螺旋和Ｂ片层的转角、环形区或一些无规则的肽　段。改造的方法可以是使其中有些肽段随机化，也可以将其　它蛋白质和多肽分子中的活性有关序列插入其间。这种技　术不仅可以提供活性序列所需的某种立体结构，而且比简　单合成的活性碎片更稳定。将连接肽段随机化的一个例子　是，改变一些蛋白水解酶制剂的专一性。　８参考文献　…杨锡洪，夏文水酶法水解血红蛋白制备亚铁血红素肽ⅡＪ．食品与机　械，２００５，２１（１）：１４－１６．　【２】迟玉杰，田波．蛋清寡肤制备技术的研究ⅡＪ．食品科学，２００４，２５（１１）：　１７７　１７９．　（下转第１５３页）　１５１　维普资讯 http://www.cqvip.com

《堡　』　型焦　稳固。　生　至旦　工作研究　市场风险的能力。从而使这种“对立统一”的利益关系更加　３加强扶持龙头企业建设。发展壮大龙头企业群　有“等、靠、耍”的思想，要树立市场主体意识和竞争观念。龙　头企业自身经营管理效率的提高和规模的不断扩大才是整　个产业发展乃至生存的关键。耍以市场为先导，效益为中　心。加强企业技术改造和设备更新，与科研院所和研究机构　３．１发展规模经营．提高农业劳动生产率　东至县有各类农业产业化龙头企业７７家，年产值５００　签订技术转让协议，加快培育农产品新品种，发明新的生产　工艺。将科技成果迅速转化为生产力。资金实力雄厚的企业　应培育自主研发能力，培育新品种，依托基地，迅速推广新　品种。在自主创新的同时，抓好新品种引进，使农产品结构　与国际市场需求接轨。龙头企业还要积极利用信息网、　农业网、报纸、电视等手段获取国内外市场农产品供求及价　万元以上的龙头企业有１９家，年销售收入４，６２亿元。但是　没有～家企业跻身全省农业产业化龙头企业５Ｏ强，龙头企　业的竞争力不强。带动能力有限。要真正推进东至县的农业　产业化发展．带动更多的农户走向产业化经营之路，就必须　做大做强龙头企业，提升龙头企业的辐射带动能力。东至县　粮、棉、油、茶等产业以加工企业为主，其他产业以产业协会　格走向等信息开拓市场；以信息化带动企业发展，大力开展　为主，应重点引导成立棉花产业集团、粮油产业集团、茶叶　产业集团。以产权整合为先导，逐步建立农业产业加工园　区，把同行业的加工营销企业集中起来，基地也逐渐向农产　品主产区集中，为规模经营和统一管理奠定良好的组织基　础。　便捷快速的网上交易；积极开展招商引资，依靠外商的资　金、技术、信息和销售渠道拓展国外市场，发展外向型农业　产业。　４大力发展各类中介组织。提高农民组织化程度　据农业部合作指导司估计。我国目前有各种农民合作　组织约１５万个．参加各种合作组织的农户仅占全国农户总　３．２推行标准化生产．实施品牌战略　没有标准化，就没有产业化。标准化生产以基地为依　托，基地建设是推行标准化生产的基础。东至县是全国商品　数的２．５％左右。与一些发达国家８０％以上的农户都是合作　社社员，每个农户平均参加４＂－－５个合作社的情况相比，我国　农民的组织化程度还很低。这种状况不仅成为农产品进入　粮基地县、优质棉基地县、无公害茶叶生产示范县、经济林　建设先进县和省畜牧业生产先进县，已具备建立标准化生　产基地的基础。为确保农产品品质，要借鉴山东省寿光推行　市场的瓶颈，而且使农民在市场上处于一种被动接受交易　定价的地位，他们的收入只能维持简单再生产的水平。　标准化生产的经验，对基地实行“统一技术培训、统一检测　仪器、统一制度规范、统～注册商标、统一销售标识”管理，　建立农副产品质量检测中心。进一步健全和完善农副产品　的农药残量、兽药残量检验检疫标准体系，使之与国内外质　东至县的农业产业化经营的组织载体缺乏．力量薄弱。　为提高农民的交易地位和抵御市场风险的能力，保障其合　法利益，就要大力鼓励各种中介组织，尤其是农村专业合作　经济组织的建立。农民在自愿互利基础上为保护农民自身　利益、共同对抗商业垄断组织的不正当竞争而建立的各种　农协组织，是农业社会化服务体系的重要组成部分。在　法律、与资金上给予一定的扶持，有利于壮大各级农协　量检验检疫标准相统一，这是努力打造名牌农产品，统一和　保证农产品品质、等级，实现标准化生产、加工所必需的，也　是增强农产品国际竞争力、扩大出口所必需的。在推行标准　化生产的基础上，实施品牌发展战略。将全县名优茶品牌统　一组织，完善农业社会化服务体系，加快农业产业化发展。加　强监督管理，使各类中介组织真正成为连接农户与龙头企　业、农户与市场的桥梁和纽带；抓紧制定专业合作经济组织　管理法规，明确其法人地位，制定相应的扶持；加强合　为“东至云尖”，把棉花的品牌统一为“江花”、“升金”牌，　把棉油的品牌整合到“大历山”、“双塔”牌上来，努力将它们　打造成像“华英”鸭、“双汇”火腿肠、“乐义牌”蔬菜那样的为　消费者普遍认可的名牌。积极申报绿色、有机、无公害食品　认证和ＩＳＯ９０００国际质量体系认证。通过广告展销活动扩　作经济组织对农户的产前、产中、产后服务，发挥龙头带动　作用。　Ｓ参考文献　［１１乔娟，张宏升．论农业产业带建设与提升农产品竞争力叽农业经济　题。２００４（１２）：３５—３８．　大农产品的知名度。只有打造和树立一批名牌产品和知名　企业，才能全面推动全县农业产业化的发展。　３－３转变企业经营理念。树立市场主体意识和竞争观念　龙头企业的发展壮大需要部门的扶持。因此，龙头　企业应积极争取对龙头企业建设与管理、基础建设、服　务体系建设方面的财税支持和税收减免优惠。但是不能抱　・【２】洪绂曾．我国农业　】　化的战略思路和重点【Ｎ】．农民日报。２００５，１１．１１　（５）．　『３】杜吟棠．农业产业化和农民组织创新对农民收入的影响Ｕ１ｌ中国农村　观察．２００５．（３）：９－１８．　＋－＋一＋ｎ＋一＋　＋一＋一＋一＋一＋“＋“＋ｎ＋”＋”＋　＋一＋－＋一＋－＋－＋－＋“＋－—　＋一＋一　＋一＋－＋－＋一＋一—　＋　＋一＋一＋一＋一＋－＋－＋。＋“十一＋　（上接第１５１页）　『３１鲁伟，任国谱，宋俊梅．蛋白水解液中多肽含量的测定方法Ｕ１ｌ食品科　学，２００５，２６（７）：１６９—１７１，　ｈｕｍａｎ　ｎａｔｕｒａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ【ｃ１．Ｔｈｅ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｐｅｐｆｄｅ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　Ｐｒｏｇｒａｍ　ａｎｄ　Ａｂｓｔｒａｃｔｓ．Ｄａｌｌａｎ，２００２，６２．　【７】罗以勤，王梁华，焦炳华．小分子活件肽筛选方法Ｕ】．生命的化学，　２００４。２４（１）：１６—１８．　［４】周彦钢．贾建平乳鸽肽的研制Ｕ】ｌ食品研究与开发，２００５，２６（】）：８９—　９（）　【８】刘绛光，张海鸿．小分子肽分离方法研究进展卟中Ｎ￣－４ｇ药物杂志。　２００５，２６（４）：２４４—２４６．　【５】吴苏喜。刘瑞必，郭撮华，等蛇肉有限酶解工艺的研究Ｕ】．食品与机　械，２００４，２０（６）：８－１０　ｆ６Ｊ　Ｚｈａｎ　ＪＢ，Ｘｉａ　Ｚ．Ｕｓｉｎｇ　ｐｈａｇｅ　ｄｉｓｐｌａｙ　ｔｏ　ｉｄｅｎｔｉｆｙ　ｐｅｐｆｉｄｅｓ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｔＯ　【９１　Ｂｒａｉｓｔｅｄ　ＡＣ，Ｗｅｌｌｓ　ＪＡ．Ｍｉｎｉｍｉｚｉｎｇ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｄｏｍａｉｎ　ｆｒｏｍ　ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　ＵＩ　Ｐｒｏｃ　Ｎａｉｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ．１９９６（９３）：５６８８－５６９２．　１５３